Описание взятия крови у коровы на анализы. Из хвостовой вены

На сегодня решил сделать еще один пост. И будет он посвящен самому трудоемкому, и самому массовому процессу в нашей ветеринарной жизни - это взятие крови у коров для диагностических исследований, таких как например: лейкоз, бруцеллез, лептоспироз и т. д., и для биохимического исследования в осенне-весенний период.

Наши дедушки с бабушками ветеринарной службы брали кровь традиционно, да и сейчас до сих пор так учат в наших ветеринарных ВУЗах - из яремной вены. Но наука и технологии не стоят на месте. Прогрессивные умы человечества постоянно работают над совершенствованием новых способов работ, стороной не обошло и ветеринарное направление.

Всех нас учат в институтах ветеринарии, что кровь нужно брать из яремной вены, в многоразовую стеклянную пробирку, используя многоразовую металлическую иголку разного диаметра.

Взятие крови в стеклянную пробирку

Как видно на верхнем фото, чтобы взять кровь, нужно во-первых зафиксировать животное, наложить на шею резиновый жгут (он нужно чтобы лучше определялась яремная вена). Далее нужно с размаха попасть в вену, пробив кожу моментально. И только потом подставлять пробирку. В чем сама неудобность - затрата времени, средств, сил, рабочей силы.

Но как выше писал я уже, человечество не стоит на месте, и постоянно совершенствует свои подходы к работе, попутно облегчая их.

Не так давно, а именно, в 2000-х годах к нам приехали иностранцы, и рассказывали о том что мы тут древние, ничего не знаем, и будем вас учить. И действительно, показали как нужно брать кровь у коров по современным стандартам. А именно, в вакуумную пробирку одноразового использования (см. фото ниже )

взятие крови у коровы из хвостовой вены в вакуумную пробирку

Скажу сразу, сейчас до сих пор есть противники такого метода - метода взятия крови из хвостовой вены, они считают, что является классикой, то не умирает никогда, ну как по Ленину.

Хотя, как вы можете видеть на фото, маленькая вакуумная пробирка, нет лишней или даже дополнительной фиксации животного(!) что очень важно для проведения зооветеринарных мероприятий. На такую процедуру взятия крови уходит максимум полминуты-минута, в то время, как при старом методе взятия крови, иногда уходит и до десяти минут!
Следующий фактор который нужно отнести в плюс - человек не контактирует с кровью, а значит риск заболеть лейкозом или бруцеллезом он минимален, или вообще исключен
Следующий фактор - кровь под вакуумом сама идет в пробирку, и занимает это секунды.
Следующий фактор - животное спокойнее стоит, когда у нее кровь берут из хвостовой вены, нежели их яремной вены.
Следующий фактор - кровь не попадает во внешнюю среду и на объекты внешней среды (подстилка, кормушка, поилка и т.д.) - это я указал в аспекте, если животное может быть больным лейкозом, бруцеллезом и т. д.
Следующий фактор - стоимость одной пробирки вместе с иголкой одноразовой 8 рублей. Да и не так часто приходится брать кровь - один-два раза в год (массово при ветеринарных обработках), да и в текущем плане - при биохимическом исследовании крови у коров. Раньше нужно было: намыть стеклянных пробирок ну грубо говоря пробирок 600-1000, затем их прокипятить, затем уложить, потом после того как слили кровь их снова помыть и так все по кругу. Да и бьются они часто, и травмирование ветеринарного работника и самого животного тоже часто бывает.
Следующий фактор - Не надо переливать кровь, после того как она отстоится. Сразу поставили в специальный планшет и отправляем в лабораторию.
Следующий фактор - подписывать нужно саму пробирку, и это очень удобно, в то время, как раньше это было очень трудоемко (нужно было нарезать специальные резиночки, потом одеть их на стеклянные пробирки, затем когда кровь возьмут подписать, а если нет резиночки, то бумажку заворачивали в ватку и сверху вводили в стеклянную пробирку).

Ну вот, вроде все рассказал, и это будет не последний мой пост. Очень много интересного вас ждет впереди!

В последние годы ветеринары проявляют всё больший интерес к современной методике забора крови у сельскохозяйственных животных с использованием систем вакуумного забора крови. Однако, не всем специалистам удалось из первых рук получить достоверную информацию об особенностях и преимуществах новой методики и ознакомиться с ней на практике.

До сегодняшнего дня широко распространённым способом забора крови у животных (в частности КРС) остаётся взятие её из ярёмной вены либо из хвостовой вены, но также, как и из ярёмной, с использованием кровопускательных (или инъекционных) игл и стеклянных пробирок (не вакуумных). Но данная методика имеет ряд серьёзных недостатков:

1. Кровь набирается через кровопускательную иглу самотёком в открытую пробирку. Это очень часто приводит к разбрызгиванию крови, в связи с чем высок риск инфицирования животных и человека. Некоторые используют шприцы, но это не избавляет от необходимости переливать кровь в открытую пробирку. Если нужна не сыворотка, которая выделится в стеклянной пробирке (но не в пластиковой), а цельная кровь, то нужно вручную отмерять необходимый для исследований объём крови и затем вручную добавлять нужное количество реагентов (где тоже возможны ошибки в дозировке). К тому же, переливание крови из шприца в пробирку зачастую приводит к гемолизу, что искажает результаты исследований или делает их невозможными. Также ошибочным является взятие крови шприцом с последующим переливанием крови в вакуумную пробирку.
2. Набранная самотёком в открытую пробирку, кровь теряет свою стерильность из-за воздействия на неё внешней среды, следовательно, результаты лабораторных исследований могут быть искажены. Стеклянные пробирки закрываются либо нестерильными резиновыми пробками, либо ватными тампонами, что часто приводит к открытию пробирки с разлитием крови.
3. Стеклянные пробирки часто разбиваются – соответственно, нужно не только ликвидировать последствия этого в виде осколков и разлитой крови, но и повторно брать пробу крови у животного.
4. При заборе крови из ярёмной вены необходима фиксация животного, то есть привлечение к процедуре дополнительного персонала, с соответствующими затратами труда, нервов, времени и финансов.
5. Жёсткая фиксация, а также боль при взятии крови толстостенными кровопускательными иглами большого диаметра вызывает стресс у животных. В случае с КРС это приводит к неизбежному снижению надоев молока от 0,3 до 1 л в день в течение нескольких дней. На 1000 голов убытки от падения надоев могут составлять до 20-25 тыс. руб (кстати, одна только эта сумма значительно превышает стоимость вакуумных систем забора крови, необходимых для забора крови у 1000 голов).
6. Грубая фиксация приводит к массовому перезаражению лейкозом ранее здоровых животных, через травмирование слизистой носовой полости.

Системы вакуумного забора венозной крови имеют преимущества, более чем достаточные для того, чтобы навсегда забыть о прежней методике взятия крови.

Состоит вакуумная система из трёх компонентов:

1. Двусторонняя игла - резьбовая, либо автоматическая (разной длины и диаметра).
2. Иглодержатель - резьбовой, либо автоматический.
3. Вакуумная пробирка.

Пробирка стерильна, герметична, изготовлена из небьющегося биологически инертного пластика (полиэтилентерефталат), не влияющего на результаты исследований.

• для получения сыворотки используется активатор свёртывания (кремниевое напыление, активирующее образование сгустка крови и выделение сыворотки);
• для получения цельной крови используется антикоагулянт К2 ЭДТА (Трилон Б).

В пробирку не надо вручную добавлять реагенты – после забора крови вакуумную пробирку (как с крышкой, так и без неё) можно центрифугировать и помещать в анализатор.

Пробирки могут быть с разным объёмом вакуума (следовательно, и объёмом забираемой крови) – от 2 до 10 мл. Самые востребованные объёмы – 9-10 мл (для КРС, свиней, лошадей). Для мелких животных можно использовать пробирки на 2, 3, 4 мл.

Преимущества вакуумных систем в сравнении с обычными иглами и пробирками:

1. Двусторонние иглы с лазерной заточкой среза легко входят в вену, не вызывая сильных болезненных ощущений. Если кровопускательные или инъекционные иглы применяются диаметром 1,2 мм (18G), то двусторонние иглы вакуумных систем можно использовать диаметром 0,9 мм (20G) – так как эти иглы тонкостенные, то при меньшем внешнем диаметре иглы, её внутренний диаметр не уступает в пропускной способности иглам с толщиной 1,2 мм. Внешняя и внутренняя поверхности иглы обработаны силиконом, поэтому кровь свободно течёт в пробирку, не вызывая тромбирования иглы. Резиновый клапан на дистальном конце иглы предотвращает разбрызгивание крови в момент нахождения иглы в вене при отсутствии пробирки. Благодаря этому, можно набрать кровь в несколько пробирок, не вынимая иглы из вены - одна пробирка вынимается из иглодержателя, и вставляется другая пробирка для забора новой пробы крови (если необходимо взять кровь сразу на несколько видов исследований).
2. Сохраняется герметичность системы во время взятия пробы, кровь остаётся стерильной и не разбрызгивается, что исключает возможность перекрёстного инфицирования.
3. Вакуумная пробирка сделана из небьющегося материала. Не нужно собирать осколки стеклянных пробирок и убирать разлитую кровь (возможно инфицированную).
4. Сокращается время свёртывания крови в пробирке. Благодаря активатору свёртывания (кремниевое напыление) сыворотка выделяется за 20-30 минут.
5. Проба крови набирается в вакуумную пробирку, в ней же транспортируется в лабораторию, в ней же центрифугируется и в ней же исследуется в анализаторе. То есть, отпадает необходимость переливания крови из одной пробирки в другую.

Преимущества методики забора крови с использованием вакуумных систем:

1. Кровь берётся из хвостовой вены КРС одним специалистом без фиксации животного. Это наиболее простой и эффективный способ, хотя можно брать кровь и из других вен.
2. Отсутствие стресса у коровы исключает снижение надоев молока, что позволяет экономить значительные средства. Снижается или полностью отсутствует травмирование ветеринаров из-за ударов животных.
3. На взятие крови у одной коровы, включая подготовку вакуумной системы, затрачивается около 30 секунд. Таким образом, ветеринарный врач может за один день самостоятельно, без помощников, взять пробы крови у стада КРС в 300-500 голов. Снижение времени пребывания ветработников в местах расположения животных позволяет последним спокойно принимать корм и отдыхать между дойками.

При взятии крови двусторонняя игла закрепляется в иглодержателе, вводится в вену, затем вакуумная пробирка вводится в иглодержатель таким образом, что дистальный конец иглы проходит сквозь мембрану крышки, и кровь, под воздействием вакуума, сама заполняет пробирку.

После наполнения кровью пробирка вынимается из иглодержателя, а иглодержатель с иглой извлекается из вены. Игла утилизируется. Пробирка аккуратно переворачивается 2-3 раза (для лучшего смешивания крови и реагента) и ставится в штатив, уже готовая к транспортировке в лабораторию, центрифугированию и исследованию в анализаторе.

ЗАО «Фирма «Домен» предлагает вакуумные системы Venosafe TERUMO (производство Бельгия) и Bodywin (производство Китай).

Между различными системами забора крови (в том числе, поставляемыми в Россию другими компаниями) принципиальных отличий нет. Однако, TERUMO (Бельгия) является единственным в мире производителем, который выпускает двусторонние иглы для вакуумных систем не только с резьбовым соединением с иглодержателем, но и с автоматическим (безрезьбовым). Эта отличительная особенность высоко оценена ветврачами, сталкивающимися с необходимостью забора крови сразу у нескольких десятков или сотен животных за один день силами одного или двух человек.

При использовании резьбовых игл необходимо учитывать дополнительные затраты времени и сил персонала для того, чтобы извлечь резьбовую иглу из иглодержателя, не нарушая технику безопасности, нужен специальный контейнер для утилизации игл, оснащённый разъёмом в крышке, куда вставляется игла и поворотом держателя выкручивается и падает в контейнер. Такие контейнеры достаточно дорогие и их мало кто применяет. Поэтому, специалисты вынуждены извлекать использованную резьбовую иглу из иглодержателя, надевая на неё защитный колпачок и вручную выкручивая и выкидывая в какую-нибудь тару. Если речь идёт о заборе крови у пары десятков голов, то особых проблем это не вызывает, если нарушение техники безопасности при таких манипуляциях для кого-то не является проблемой. Но при заборе крови у нескольких десятков или сотен голов (особенно немолодыми ветеринарами) возникает не только значительная потеря времени на вкручивание-выкручивание игл, но и перенапряжение рук (сухожилий). Кроме того, что самое неприятное и опасное, очень высока вероятность травмирования потенциально инфицированной использованной иглой при очередном надевании на неё колпачка для последующего выкручивания из иглодержателя. Поэтому, использование автоматических игл и иглодержателей на практике выгоднее и безопаснее, чем резьбовых, несмотря на то, что автоматические чуть дороже. Стоят автоматические иглы лишь на 50 копеек дороже резьбовых (производства TERUMO). Разница в цене автоматических и резьбовых иглодержателей на первый взгляд достаточно велика, но она становится совершенно несущественной при пересчёте стоимости держателя на одну процедуру забора крови - автоматические иглодержатели с механизмом сброса иглы можно использовать до 500 раз, подвергая соответствующей обработке после каждого использования. То есть, себестоимость иглодержателя в пересчёте на 1 забор крови = 3-5 копеек.

Использовать автоматические (безрезьбовые) иглы и иглодержатели очень легко. Игла просто защёлкивается в держатель, а после использования, нажатием 2-х кнопок, сбрасывается в любой контейнер для утилизации игл (даже неспециализированный). Тут же в иглодержатель можно защёлкивать новую иглу, и так же быстро сбросить после очередного использования. Иглодержатель, при правильном использовании, не контактирует с кровью, поэтому на практике он не может быть звеном передачи инфекции. Но, для соблюдения санитарных норм, каждый иглодержатель после использования должен быть подвергнут соответствующей обработке для дезинфекции.

Кроме наличия автоматических игл и иглодержателей, преимуществом ЗАО «Фирма «Домен», как поставщика вакуумных систем, является то, что в нашем ассортименте всегда имеются в наличии не только двусторонние иглы длиной полтора дюйма (1 1/2" = 38-40 мм), но и длиной 1 дюйм (1" = 25 мм). При заборе крови из ярёмной вены КРС и свиней используются иглы длиной 40 мм, а при заборе крови из хвостовой вены КРС можно применять иглы и на 40 мм, но гораздо удобнее на 25 мм.

1. ПОЛУЧЕНИЕ КРОВИ У ЖИВОТНЫХ Для взятия крови у животных производят обработку операцион­ного поля (выстригание или выбривание волосяного покрова, протирание кожи спиртом и эфиром), а затем надрезают (прокалыва­ют) кровеносный сосуд или вводят в него иглу, предварительно подвергнутую стерилизации (рис.1). Принудительной фиксации животных при взятии крови следует, по возможности, избегать. Для получения крови у мелких животных и птиц иногда прибегают к пункции желудочков сердца.

Лошади, крупный и мелкий рогатый скот. Небольшие количества крови для анализа у лошадей и рогатого скота получают из ушной вены путем ее надреза или прокола инъекционной иглой. Выступившую кровь насасывают в пипетку или собирают по каплям на часовое стекло, предварительно промытое антикоагулянтом. У овец можно производить, кроме того, пункцию кожной вены, расположенной под внутренним углом глаза.

Для получения больших количеств крови производят пункцию яремной вены на границе верхней и средней трети шеи. После фиксации животного большим пальцем левой руки сдавливают вену ниже места пункции (у крупного и мелкого рогатого скота накладывают резиновый жгут), а затем прокалывают кровопускательной или инфузионной иглой кожу и стенку вены. Иглу вводят против тока крови под углом 45° (рис. 2). Кровь собирают в стерильный сосуд. Для получения крови из глубоко расположенных сосудов (воротной, печеночной, задней полой, общей брыжеечной, рубцовой и др. вен) производят их катетеризацию с помощью нейлоновых или тефлоновых катетеров.

Для взятия крови у крупных животных используют приборы-автоматы. Они имеют разную конструкцию, но в состав их обязательно входят корпус, иглодержатель, держатели для пробирок, ударный механизм с пружиной. (рис. 3).

Свиньи. У свиней малые количества крови получают путем надреза скальпелем большой ушной вены. Центральный конец сосуда у корня уха зажимают при этом пальцами. Для получения больших количеств крови отсекают ножницами или скальпелем отрезок хвоста длиной 1 – 1,5 см. По окончании кровопускания рану дезинфицируют, а кончик хвоста сдавливают резиновым кольцом или перетягивают бинтом на 1-2 суток. У поросят рекомендуют получать кровь путем прокола иглой или микропипеткой орбитального венозного синуса. Животное при этом фиксируют лежа, в спинном положении. За один раз берут от 5 до 30 мл крови.

Рис. 1. Иглы для взятия крови. А-Г – из уха и пальца; Д-Ж – из вены.

1 - съемное лезвие иглы Франка, 2 – головка, 3 –подвижная гайка, 4 – курок

Собаки. Небольшие количества крови у собак (кошек) получают путем надреза края уха или прокола мягкой части ступни. Для получения больших порций крови производят пункцию передненаружной плюсневой вены, расположенной на наружной поверхности голени. Животное кладут на бок или фиксируют в станке; конеч­ности сдавливают руками или жгутом ниже коленного сустава. Иглой прокалывают сначала кожу, затем стенку вены. Кровь насасывают в шприц.

Рис. 2. Взятие крови у лошади Рис. 3 . Приборы для взятия крови :

из яремной вены. у животных

А – с левой сто­роны; А – автомат ПКЗ (Зенкова);

Б – с правой стороны Б – автомат ПКК-2 (Крживицкого);

В – держатель иглы и пробирки

ПКФ-1 (Филина)

Кролики. Малые количества крови у кроликов получают путем надреза или прокола вены, расположенной снаружи по тонкому краю уха. Животное при этом завертывают в полотенце или сажают в ящик с отверстием для головы; ухо предварительно погружают в теплую воду или протирают ксило­лом (спиртом).

Местом кровопускания может служить и грудная вена – v. thoracica externa, расположенная на грудной клетке сбоку. После обра­ботки операционного поля (от локтевого бугра до третьего ребра) вену зажимают пальцем около локтя. Иглу вводят против тока крови.

Иногда прибегают к пункции сердца. Иглу вкалывают в третий межреберный промежуток слева, на расстоянии 3-4 см от наружного края грудины. У кролика можно брать одновременно до 15-20 мл крови.

Морские свинки. Небольшие количества крови у морских свинок получают путем надреза края уха или прокола иглой Франка ступни животного. Для получения больших количеств крови делают пункцию яремной вены (после разреза кожи и препаровки сосуда) или пункцию сердца. Иглу вкалывают у левого края грудины, в точке, где хорошо ощущается сердечный толчок. Направление укола – внутрь к средней линии, глубина прокола 1,5-2 см. Одновременно можно взять до 5 – 10 мл крови.

Крысы и мыши. Для получения крови у крыс и мышей надсекают ухо или срезают кончик хвоста. У крупных крыс можно получать кровь пункцией хвостовой вены. Хвост опускают в теплую воду, затем обсушивают марлей и сдавливают у корня пальцами; в сосуд вводят тонкую иглу. Кровь насасывают в шприц.

Птицы. Небольшие порции крови у кур и индеек получают путем надреза или скарификации гребня (сережек). У гусей и уток делают прокол мякоти ступни. В большом количестве кровь у птиц получают из подкожной

Рис. 4. Внутренняя поверхность крыла кур.

Место пункции подкрыльцовой вены 1 помечено крестиком

подкрыльцовой вены, расположенной на внутренней поверхности крыла. Перья выщипывают, вену сдавливают пальцем в области локтевого сустава, прокол делают под углом на уровне локтевого сгиба (рис. 4).

Можно предварительно обнажить сосуд коротким разрезом кожи. Ввиду высокой свертываемости крови у птиц место прокола протирают противосвертывающей жидкостью. Выступившие капли крови переносят пипеткой в бюкс или собирают в центрифужную пробирку с антикоагулянтом. После взятия крови место пункции на несколько минут зажимают тампоном.

У гусей, уток и индеек кровь можно получать из внутренней плюсневой вены, расположенной под кожей на медиальной, поверхности плюсны, ближе к ее плантарному краю. У кур, гусей, индеек можно брать одновременно до 10-15 мл, у голубей – 1-1,5 мл крови.

При необходимости получить у кур артериальную кровь прибе­гают к пункции сонной артерии (после ее обнажения у наркотизи­рованной птицы) или к пункции левого желудочка сердца. Прокол делают слева в V-образной вырезке грудной кости с направлением иглы к плечевому суставу противоположной стороны (у кур) или под углом 45° к стенке грудной клетки, вперед (у цыплят).

Лягушки. Несколько капель крови можно получить у лягушек при срезании ножницами концов пальцев лапки. Иногда производят пункцию кожной вены, расположенной посередине живота (кожу предварительно надрезают). Можно получать кровь у лягушки и пункцией обнаженного сердца.

Примечание . Кровь у человека получают путем прокола мякоти пальца иглой Франка или специальными копьями-скарификаторами одноразового пользования. Место взятия крови тщательно обрабатывают спиртом и эфиром. После взятия крови к месту прокола прикладывают тампон, смоченный спиртом.

2. ПОЛУЧЕНИЕ СЫВОРОТКИ, ПЛАЗМЫ, ДЕФИБРИНИРОВАННОЙ

КРОВИ И ФИБРИНА

Кровь состоит из жидкой части – плазмы и находящихся в ней во взвешенном состоянии форменных элементов – эритроцитов, лейкоцитоа и тромбоцитов. Для получения плазмы кровь необходимо предохранить от свертывания добавлением антикоагулянтов. Такая кровь после длительного стояния в пробирке или центрифугирования разделяется на плазму (верхний слой) и форменные элементы. Если выпущенную в сосуд кровь не стабилизировать антикоагулянтом, происходит ее свертывание – образование сгустка, содержащего форменные элементы и выпавший в осадок белок фибриноген. Сгусток постепенно уплотняется, стягивается и от него отделяется прозрачная желтоватого цвета жидкость – сыворотка. Сыворотка представляет собой плазму, лишенную фибрина. Схема, иллюстрирующая соотношение составных частей крови, изображена на рис. 5.

Если выделить из крови фибриноген механическим путем, то такая кровь теряет способность к свертыванию. Она содержит все составные части, за исключением

фибриногена, и называется дефибринированной кровью.

Цель опыта: 1) изучить соотношение и взаимосвязь составных частей крови, 2) получить плазму, сыворотку, дефибринированную кровь и фибрин.

Подготовка опыта: Лошадь зафиксировать в станке. Подготовить операционное поле для пункции яремной вены: Заготовить иглы или автомат для взятия крови, стеклянные цилиндры на 10 – 20 мл, пробирки химические и центрифужные в штативе, колбочку на 50 – 100 мл, стеклянные шарики и антикоагулянты.

В качестве антикоагулянтов можно использовать порошок лимоннокислого или щавелевокислого натрия (20–30 мг на 10 мл крови), раствор щавелевокис­лого калия и щавелевокислого аммония (7,0г оксалата калия, 4,5г оксалата ам­мония, 100мл воды) в дозе 0,2 мл на 10 мл крови, этилендиамин тетраусусную кислоту – ЭДТУ в дозе 0,2 мл 0,01% раствора на 10 мл крови. Na-ЭДТУ в дозе 0,5–1 мг на 5 мл крови. Одним из естес твенных антикоагулянтов является полисаха рид гепарин, содержащийся почти во всех тканях организма. Его используют в колич естве 100 ед на 1 мл крови (примерно 2 капли неразведенного гепарина на 10 мл крови).

Рис. 5. Схема основных

Составных частей крови

Ход опыта:

1. В пробирку и цилиндр с антикоагу­лянтом выпустить по 10 мл крови из яремной вены животного. Закрыв сосуд пальцем или пробкой несколько раз перевернуть его для перемешивания крови. Цилиндр поставить в термостат (кровь лошади – на 1 ч, крупного рогатого скота – на 24-48 ч), пробир­ку – в центрифугу. Центрифугировать при 3000 об/мин в течение 20-30 мин. Убедиться, что при стоянии или центрифугировании кровь рас­слаивается на плазму и форменные элементы.

2. В пробирку или цилиндр без антикоагулянта выпустить 10 мл крови животного и поставить ее в термостат при 38°С на несколько часов. Образование кровяного сгустка и частичная ретракция, т.е. его стягивание и самопроизвольное отделение сыворотки, наступает у лошади через 1-3 ч, а полное отделение сгустка – через 12-18 ч. У крупного рогатого скота ретракция протекает значительно мед­леннее. Из пробирки с полной ретракцией сгустка слить или отсо­сать сыворотку и сравнить ее с плазмой. Сыворотка имеет желтова­то-соломенный цвет и более прозрачна, чем плазма.

3. Положить в стеклянную колбочку 10–12 стеклянных буси­нок и выпустить в нее из сосуда животного 20-30 мл крови. Взбал­тывать кровь вращательными движениями в течение 10-15 мин. Фибриноген, выпадающий в осадок в виде волокнистых нитей фиб­рина, оседает на шариках. Профильтровать содержимое колбы через 2 слоя марли. Фильтрат представляет собой дефибринированную кровь, содержащую сыворотку и форменные элементы.

4. Осевшие на шариках нити фибрина отмыть от фор­менных элементов теплой водой. Он имеет вид белого волокнистого вещества.

5. Определить содержание фибриногена в крови. С этой целы сначала необходимо получить цитратную плазму. В пробирку налить 1 мл 3,8% раствора лимоннокислого натрия и прилить 9 мл крови. Перемешать и отцентрифугировать в течение 20-30 мин при 3000 об/мин. Из полученного слоя плазмы отмерить 1 мл, перенести в другую пробирку, прибавить 0,4 мл 5% раствора CaCl 2 и встряхнуть. После свертывания плазмы образовавшийся сгусток фибрина намотать на стеклянную палочку и, вынув из пробирки, поместить на беззольный фильтр. Сжимая фильтр, получить воздушно-сухой остаток фибрина, который взвесить на торзионных весах. В норме в 1 мл цитратной крови содержится 6-9 мг воздушно-сухого фибрина. При пониженном содержании фибриногена может нарушаться свертываемость крови.

1. Исследование крови животных

К специальным методам исследования крови прибегают в тех случаях, когда необходимо и возможно установить диагноз на уровне изучения морфологических характеристик клеток в мазке или изменения их функциональных свойств под воздействием различных факторов. В первом случае исследования ведут с использованием цитохимических красителей, специфически реагирующих с определенными включениями или компонентами клеток; функциональные свойства клетки определяют как ответ на физико-химические воздействия .

1.1 Правила взятия крови у животного

Условия взятия крови и ее сохранность до начала лабораторных исследований имеют важное значение при получении достоверных результатов. Во многом эти результаты зависят от техники взятия крови и используемых при этой инструментов. В организме различает артериальную, венозную и капиллярную кровь, которая имеет незначительные цитологические и биохимические отличия. Для морфологических исследований пользуются почти исключительно капиллярной кровью, а при биохимических – венозной.

Капиллярную кровь берут из внутренней поверхности ушной раковины. Шерсть на месте взятия крови выстригают, очищают место укола ватным тампоном, смоченным спиртом-эфиром. Укол делают на глубину до 2 мм. Первую каплю крови стирают, т.к. она содержит случайные примеси и лимфу, а последующие берут для исследования. Очень важно, чтобы кровь вытекала из ранки без надавливания на ткани, иначе она смешивается с лимфой и изменяет свой клеточный и биохимический состав. Истечение крови можно ускорить, если предварительно прогревать место укола в теплой воде или источником сухого тепла (фен, электролампа).

При венепункции прокол окружающих вену тканей и стенки вен делают в один прием. Иглы для взятия крови должны быть с коротким срезом и достаточно большим диаметром, чтобы не травмировать противоположную стенку вены и не вызвать повреждения эритроцитов. Предварительно иглы стерилизуют кипячением в 1%-ом растворе бикарбоната натрия, место вкола обрабатывают аналогично получению капиллярной крови.

При взятии крови из яремной вены иглу вкалывают на границе перехода верхней трети шеи в среднюю. Чтобы вызвать достаточное наполнение вены и уменьшать ее подвижность, вену сдавливает в середине шеи резиновым жгутом или пальцем. При проколе вены необходимо держать иглу в руке так, чтобы направление ее совпало с линией хода вены и чтобы срез иглы был направлен вверх, к голове. Иглу вкалывают под острым углом – в 20–30°. При попадании в вену из иглы вытекает кровь.

Кровь должна стекать по стенке пробирки по избежании разрушения эритроцитов и при необходимости немедленно смешиваться с достаточным количеством антикоагулянта.

Перед извлечением иглы из вены резиновый жгут снимают, пережимают вену пальцем выше места вкола, иглу извлекают, а место вкола некоторое время сдавливают тампоном для предотвращения образования гематомы. В заключении область венепункции дезинфицируют настойкой йода и заливают Колодием .

В зависимости от характера исследований готовят определенное количество пробирок. Стенки стеклянной посуды способны обмениваться ионами с кровью, а следы моющих средств и поврежденные пробирки влияют на активность, ферментов. Это можно исключить, если использовать пластмассовые, пробирки одноразового пользования; для некоторых исследований стенки стеклянных пробирок покрывают слоем парафина или силиконового масла.

В зависимости от задач исследования анализу подвергают цельную кровь, плазму или сыворотку.

В цельной крови определяют морфологические показатели, а также содержание глюкозы, кетоновых тел, меди, цинка, кобальта, марганца, селена и др., т.е. веществ, равномерно распределенных между плазмой и эритроцитами. Для исследования веществ, неравномерно распределенных между клетками и жидкой частью крови, следует использовать сыворотку или плазму. В сыворотке, например, исследуют общий белок и его фракции, остаточный азот, мочевину, свободные аминокислоты, липиды, холестерин, билирубин, кальций, неорганический фосфор, магний, йод, связанный с белком (СБЙ), каротин, витамины, ферменты и др. В плазме – резервную щелочность, содержание натрия, калия, неорганического фосфора, магния, каротина, витаминов А, С и др.

Для получения пробы цельной крови или плазмы ее стабилизируют, т.е. в пробирку вносят противосвертывающее вещество – антикоагулянт. Антикоагулянты лучше применять в виде растворов.

Для получения сыворотки пробирки с кровью рекомендуется в процессе взятия крови помещать в термостат с температурой до 38°С. При массовых обследованиях животных таким импровизированным термостатом может быть достаточная емкость с водой указанной температуры. После завершения работ по взятию крови, свернувшиеся пробы обводят тонкой спицей из нержавеющей стали для лучшего отделения сыворотки и ставят в термостат при 37–38°С на 1–2 часа для окончательного отделения сыворотки. Сыворотку сливают и центрифугируют 20 минут при 2000–3000 об/мин.

Для получения плазмы кровь с антикоагулянтом центрифугируют 20–30 минут при 2000–3000 об/мин. Плазма крови отличается от сыворотки наличием фибриногена.

Цельную кровь, плазму и сыворотку для непродолжительного хранения помещают в холодильник (+2…+4°С), длительное хранение сыворотки требует температуры – 20°С.

Нарушение условий хранения проб может стать причиной погрешностей анализа. В результате длительного стояния сыворотки, над эритроцитами могут наступить сдвиги в концентрации ряда компонентов: повышается концентрация калия, активности кислой фосфатазы, аминотрансфераз, лактатдегидрогеназы, гидроксибутиратдегидрогеназы, понижается содержание глюкозы вследствие гликолитических процессов. При температуре около 20°С в цельной крови возрастает содержание аммиака, многие ферменты даже при температуре холодильника быстро теряют свою активность (креатинкиназа, кислая фосфатаза), в лактатдегидрогеназа, напротив, быстрее теряет активность при низких температурах .

Возникший при взятии или хранении гемолиз эритроцитов приводит к повышению концентрации калия, активности кислой фосфатазы, аминотрансфераз, лактатдегидрогеназы, гидроксибутиратдегидрогеназы. Неумелое встряхивание проб при перемешивании их содержимого или при транспортировке также может вызвать гемолиз эритроцитов.

При проведении специальных исследований нужно внимательно следить за выполнением особых, оговоренных в описании методик правил взятия, консервации и хранения проб крови .

1.2 Определение скорости оседания эритроцитов (СОЭ)

Скорость оседания эритроцитов (СОЭ) – неспецифический лабораторный показатель крови, отражающий соотношение фракций белков плазмы; изменение СОЭ может служить косвенным признаком текущего воспалительного или иного патологического процесса. Проба основывается на способности эритроцитов в лишенной возможности свёртывания крови оседать под действием гравитации. В норме величина СОЭ у собак не превышает 2–5 мм/час, а у кошек – 6–10 мм/час.

Принцип метода заключается в следующем. Удельная масса эритроцитов превышает удельную массу плазмы, поэтому они медленно оседают на дно пробирки. Скорость, с которой происходит оседание эритроцитов, в основном определяется степенью их агрегации, то есть их способностью слипаться вместе. Из-за того, что при образовании агрегатов уменьшается отношение площади поверхности частиц к их объёму, сопротивление агрегатов эритроцитов трению оказывается меньше, чем суммарное сопротивление отдельных эритроцитов, поэтому скорость их оседания увеличивается. Агрегация эритроцитов главным образом зависит от их электрических свойств и белкового состава плазмы крови. В норме эритроциты несут отрицательный заряд и отталкиваются друг от друга. Степень агрегации (а значит и СОЭ) повышается при увеличении концентрации в плазме так называемых белков острой фазы – маркеров воспалительного процесса. В первую очередь – фибриногена, C-реактивного белка, церулоплазмина, иммуноглобулинов и других. Напротив, СОЭ снижается при увеличении концентрации альбуминов.

Определение СОЭ проводят методом Панченкова (в капилляре). В методе Панченкова в качестве антикоагулянта используют цитрат натрия. В капилляр набирают 2,5 мкл цитрата и в тот же капилляр добирают 7,5 мкл крови или в заранее раскапаные пробирки с цитратом добавляют 7,5 мкл крови, кровь с цитратом перемешивают в пробирке, снова набирают в капилляр и устанавливают в специальный штатив на 1 час. По методу Вестергрена (в пробирке).

В градуированный на 100 делений капилляр Панченкова набирают до метки «Р» 5%-ый раствор цитрата натрия и переносят его на часовое стекло. Затем в тот же капилляр набирают дважды кровь до метки «К» и оба раза выдувают её на часовое стекло. Кровь, тщательно перемешанную с цитратом натрия, вновь набирают в капилляр до метки «К». Капилляр ставят в штатив строго вертикально. СОЭ учитывают через 1 час, при необходимости через 24 часа и выражают в миллиметрах.

Более ста лет данный лабораторный тест применяется для количественного определения интенсивности разнообразных воспалительных процессов. Так, чаще всего увеличение СОЭ связано своспалительными процессами, отравлениями, инфекциями, инвазиями, опухолями, гемобластозами, кровопотерей, травмами, оперативными вмешательствами.

Хотя воспаление и является наиболее частой причиной ускорения оседания эритроцитов, увеличение СОЭ также может обусловливаться и другими, в том числе и не всегда патологическими, состояниями .

Несмотря на свою неспецифичность определение СОЭ все еще является одним из наиболее популярных лабораторных тестов для установления факта и интенсивности воспалительного процесса.

1.3 Определение содержания гемоглобина

Определение содержания гемоглобина в крови животных является одним из самых важных и массовых показателей. Для определения гемоглобина чаще всего анализируют производные гемоглобина, образовавшиеся в процессе его окисления и присоединения к гену различных химических групп, приводящих к изменению валентности железа и окраски раствора .